No.225 受容体型チロシンキナーゼ二量体化アッセイの応用例

本日はこれまでのブログ記事の中でも人気の高い記事の一つ、PathHunter^®受容体型チロシンキナーゼ二量体化アッセイをご紹介したいと思います。

受容体型チロシンキナーゼ（RTK）は細胞表面に存在する受容体キナーゼの一種であります。細胞外のシグナルをリガンドの結合という形で受け取り、タンパク質鎖中にある特異的なチロシンアミノ酸をリン酸化することによって、細胞内シグナル伝達系にそのシグナルを中継する役割を果たします。RTKは、細胞の最も基本的な活動である増殖・分化・生存・代謝・移動を制御し、さまざまな組織や器官の発達と生理応答、造血や免疫応答など高次の生命現象を制御するという重要な役割を担っており、分子標的薬の創薬ターゲットとして近年注目を集めています。

RTK を介したシグナル伝達では、増殖因子などの特異的なリガンドが RTK の細胞外領域へ結合することにより、受容体の二量体化（または多量体化）が誘導され、シグナルが迅速に伝達されます。つまり、RTKへのリガンドの結合とその結果誘導される二量体化こそが、外部シグナルが細胞外から細胞内へと中継される最初のステップであるということになります。

これまでの細胞内タンパク質の相互作用を利用したアッセイ系では、受容体二量体化を正確にモニタリングすることが困難であります。DiscoverX社のPathHunter^®受容体型チロシンキナーゼ二量体化アッセイを用いれば、細胞表面のRTKの二量体化を直接的に測定することができます。

チロシンキナーゼ二量体化アッセイ原理:

本日は、PathHunter受容体二量体化アッセイを、エリスロポエチン(EPO)および代替リガンドによるエリスロポエチン受容体(EpoR)の二量体化の確認に利用した文献をご紹介させていただきます。

【文献紹介】
Tuning Cytokine Receptor Signaling by Re-orienting Dimer Geometry with Surrogate Ligands

Moraga et al., Cell. 2015 Mar 12;160(6):1196-1208

本報告では、エリスロポエチン(EPO)およびエリスロポエチン受容体(EpoR)の二重特異性抗体(DA) を代替リガンドとして利用し、EpoRの二量体化を誘導させてシグナル活性を評価した。DAによってEpoR二量体の向きと距離が変わり、その結果シグナル伝達活性の度合いを調節することができた。DAを代替リガンドとして用いることにより、遺伝子発現プロファイルやシグナル経路の活性化をバイアスしたり、変化されることが可能であることが確認された。

シグナル伝達を引き起こさないDAを用いて、恒常的活性化型JAK2V617F変異による骨髄増殖性腫瘍を持つ患者の赤血球前駆体の増殖を阻害することに成功した。このように、外部の代替リガンドによって、受容体を非活性型の二量体化へと再形成させることで、細胞間の発がん性変異によるリガンド非依存的受容体活性を阻害することができた。このようなアプローチを応用することで、二量体化受容体系シグナルの微調整を可能とする新薬の開発が期待されるであろう。

Fig.2. EPOおよび二重特異性抗体(DA)を用いて、D. EpoRの二量体化（PathHunter二量体化アッセイ)　E. EpoRのリン酸化　F. STAT5の活性化　G. Ba/F3細胞増殖　を確認した。いずれのDAもEpoRの二量体化を誘導するが、以降のシグナル活性の度合いに違いがみられた。

[結論]
●　代替リガンドによって受容体二量体構造を変化させて、二量体の向きや距離を変化させる(再形成)ことによりシグナル活性を調節することができる。
●　受容体二量体構造を変化させることでシグナル活性を調節することができる二重特性抗体は、細胞間の発がん性変異によるリガンド非依存的受容体活性を阻害することができる。

ご意見・ご質問は、お問い合わせフォームからお気軽にどうぞ。

No.217 バイアスリガンドの同定にPathHunter®セルベースアッセイ

本日はこれまでのブログ記事の中でも人気の高い記事の一つ、バイアスリガンドに関する記事を再掲載させていただきます。

DiscoverX独自のEnzyme Fragment Complementation (EFC) 技術を用いたPathHunterセルベースアッセイでは、Gタンパク質結合受容体（GPCR) に対する複数の機能アッセイ（β‐アレスチン、セカンドメッセンジャー、内在化）を提供しています。

GPCRが活性化されると、Gタンパク質依存的またはGタンパク質非依存的な事象の両方を引き起こしますが、DiscoverXのアッセイ方法は強制カップリングを行っておりませんので、細胞生物学を乱さずに各シグナル経路を定量的に評価することが可能です。

これらの特徴をもつPathHunterアッセイは、バイアスリガンドの同定にも最適です。

PathHunter GPCRシグナル経路プロファイリング原理

Fig. 1. 機能的セルベースアッセイの幅広い選択肢　

(左)　セカンドメッセンジャー (cAMP/Calcium) ：検証済み細胞株を用いた高感度かつ確実なセカンドメッセンジャーアッセイ

(中)　β‐アレスチン：Gタンパク質に非依存的なβ‐アレスチン誘導を利用したアッセイであり、あらゆる薬理作用の評価に対応
(右)　GPCR内在化：直接的かつ定量的にGPCRの内在化(エンドサイトーシス)を評価

A G Protein-Biased Ligand at the µ-Opioid Receptor Is Potently Analgesic with Reduced Gastrointestinal and Respiratory Dysfunction Compared with Morphines

概要：

Gタンパク質結合受容体（GPCR) におけるバイアスリガンドとは、GPCRの各経路を選択的に活性化または非活性化する特徴をもったリガンドのことで、バイアスリガンドを用いることにより、より安全で選択性のある治療法の開発が期待されます。β‐アレスチン-2ノックアウトマウスを用いたモルヒネの薬理作用の研究から、リガンドがβ‐アレスチン-2の誘導を引き起こさずに、ヒトµオピオイド受容体(hMOR)のGタンパク質シグナル経路のみを促進した場合には、通常よりも高い鎮痛作用が得られ、かつ副作用(胃腸機能障害および呼吸抑制)が軽減されることがわかっています。本文献では、DiscoverX社PathHunter細胞株・アッセイを用いて、hMORのGタンパク質バイアスリガンド候補物質であるTRV130についての機能評価を報告しています。

Fig. 2. TRV130は、hMORに対するGタンパク質バイアスリガンド候補物質である。(A) モルヒネと比較して、 (B) TRV130はモルヒネと同等にGタンパク質カップリングによりシグナル伝達経路を活性化させるものの、β‐アレスチン-2の誘導が抑制されている。β‐アレスチン-2の誘導は、化学発光法を用いたβ‐ガラクトシダーゼ活性を利用して測定し、Gタンパク質カップリングは、cAMPの蓄積の抑制効果を測定した。いずれもhMORを発現したHEK細胞(DiscoverX社PathHunter細胞株)を使用した。

Fig. 3. TRV130はモルヒネと比較して、hMORの内在化とリン酸化 (S375)を抑制することが示された。

ご希望の方には、最新のターゲットリストをお送りさせていただきます。ターゲット一覧のみならず、細胞株やeXpressキット、受託試験サービスでの取り扱いの有無をご確認いただけます。下記申し込みフォームよりお気軽にご請求ください。

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PathHunterターゲットリスト・申し込みフォーム

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No.177 KINOMEscan納期短縮のご案内

DiscoverX社が提供するKINOMEscan^®キナーゼ阻害剤プロファイリングサービスでは、標的ターゲットに対する迅速かつ正確で定量性のある活性部位依存的競合測定法によって、試験化合物とヒトキナーゼの結合を測定します。

この度、KINOMEscanキナーゼ阻害剤プロファイリングサービスの納期が最短5営業日*と、さらに短縮されました。お客様の創薬研究のスピードアップに是非ご活用ください。

KdELECT  >> 標準納期5営業日

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※必要書類および試験化合物が全て揃ってからの試験開始となります。またアッセイ内容によって通常よりも時間を要する場合がございます。ご不明な点はお気軽にお問い合わせください。

<特長> 

• DiscoverXでのみ取り扱いのターゲット多数　

　(CDK10, CDK12, CDK20, MLKL and MLKL (full-length), IRAK2 他) 

• 489種類のラインナップを誇る業界最大級のキナーゼアッセイパネル 

• 11種類の臨床報告のあるミュータントを含む 

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1. 興味のあるキナーゼに対して化合物の評価を行いたい 

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◇　詳細情報はこちらから

【参考資料】

◇　72種類もの化合物のバリデーションデータをご参照いただけます。

◇　Extending kinome coverage by analysis of kinase inhibitor broad profiling data.
Drug Discov Today. 2015 Jun;20(6):652-8

※文献PDFファイルをご希望の場合は送付させていただきます。お気軽にお問い合わせください。

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No.116 受容体型チロシンキナーゼ二量体化アッセイの応用例

受容体型チロシンキナーゼ（RTK）は細胞表面に存在する受容体キナーゼの一種であります。細胞外のシグナルをリガンドの結合という形で受け取り、タンパク質鎖中にある特異的なチロシンアミノ酸をリン酸化することによって、細胞内シグナル伝達系にそのシグナルを中継する役割を果たします。

RTK を介したシグナル伝達では、増殖因子などの特異的なリガンドが RTK の細胞外領域へ結合することにより、受容体の二量体化（または多量体化）が誘導され、シグナルが迅速に伝達されます。つまり、RTKへのリガンドの結合とその結果誘導される二量体化こそが、外部シグナルが細胞外から細胞内へと中継される最初のステップであるということになります。

これまでの細胞内タンパク質の相互作用を利用したアッセイ系では、受容体二量体化を正確にモニタリングすることが困難でありました。EFC技術を応用したDiscoveRx社のPathHunter受容体二量体化アッセイを用いれば、細胞表面の受容体二量体化を直接的に測定することができます。

Fig.1. PathHunter受容体型チロシンキナーゼ(RTK)二量体化アッセイでは、ターゲット受容体の一方にはProLink™ (PK) 、一方にはEnzyme Acceptor (EA) をタグ付けした受容体を発現させています。リガンド結合によってRTKの二量体化が起こり、続いて細胞内部ではチロシンキナーゼ部位のリン酸化が起こります。それに伴い立体的に隣接したPKとEAが結合することによりβ-Galの活性型酵素が再構成されます。β-Gal活性によって加水分解された基質の化学発光シグナルを測定することにより、RTKに対する試験物質の作用を同定します。

今回はDiscoveRx社のPathHunter受容体二量体化アッセイを、エリスロポエチン(EPO)および代替リガンドによるエリスロポエチン受容体(EpoR)の二量体化の確認に利用した文献をご紹介させていただきます。

Tuning Cytokine Receptor Signaling by Re-orienting Dimer Geometry with Surrogate Ligands

Moraga et al., Cell. 2015 Mar 12;160(6):1196-1208

本報告では、エリスロポエチン(EPO)およびエリスロポエチン受容体(EpoR)の二重特異性抗体(DA) を代替リガンドとして利用し、EpoRの二量体化を誘導させてシグナル活性を評価した。DAによってEpoR二量体の向きと距離が変わり、その結果シグナル伝達活性の度合いを調節することができた。DAを代替リガンドとして用いることにより、遺伝子発現プロファイルやシグナル経路の活性化をバイアスしたり、変化されることが可能であることが確認された。

シグナル伝達を引き起こさないDAを用いて、恒常的活性化型JAK2V617F変異による骨髄増殖性腫瘍を持つ患者の赤血球前駆体の増殖を阻害することに成功した。このように、外部の代替リガンドによって、受容体を非活性型の二量体化へと再形成させることで、細胞間の発がん性変異によるリガンド非依存的受容体活性を阻害することができた。このようなアプローチを応用することで、二量体化受容体系シグナルの微調整を可能とする新薬の開発が期待されるであろう。

Fig.2. EPOおよび二重特異性抗体(DA)を用いて、D. EpoRの二量体化（PathHunter二量体化アッセイ)　E. EpoRのリン酸化　F. STAT5の活性化　G. Ba/F3細胞増殖　を確認した。いずれのDAもEpoRの二量体化を誘導するが、以降のシグナル活性の度合いに違いがみられた。

[結論]

• 代替リガンドによって受容体二量体構造を変化させて、二量体の向きや距離を変化させる(再形成)ことによりシグナル活性を調節することができる
• 受容体二量体構造を変化させることでシグナル活性を調節することができる二重特性抗体は、細胞間の発がん性変異によるリガンド非依存的受容体活性を阻害することができる

RTK二量体化アッセイのターゲットリスト、詳細はこちらから。

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No.50 [リガンドバイアス] 新規のアペリン受容体アゴニスト

DiscoveRx独自のEnzyme Fragment Complementation (EFC) 技術を用いたPathHunter^®アッセイでは、Gタンパク質結合受容体（GPCR) に対する複数の機能アッセイ（β‐アレスチン、セカンドメッセンジャー、内在化）を提供しています。

GPCRが活性化されると、Gタンパク質依存的またはGタンパク質非依存的な事象の両方を引き起こしますが、DiscoveRxのアッセイ方法は強制カップリングを行っておりませんので、細胞生物学を乱さずに各シグナル経路を定量的に評価することが可能です。

これらの特徴をもつPathHunterアッセイは、バイアスリガンドの同定にもご活用いただけます。本日は弊社PathHunterアッセイを用いて、バイアスリガンドを検証した実用例をご紹介させていただきます。

PathHunter GPCRシグナル経路プロファイリング原理

Fig. 1. 機能的セルベースアッセイの幅広い選択肢　
(左)セカンドメッセンジャー (cAMP/Calcium) ：検証済み細胞株を用いた高感度かつ確実なセカンドメッセンジャーアッセイ
(中)β‐アレスチン：Gタンパク質に非依存的なβ‐アレスチン誘導を利用したアッセイであり、あらゆる薬理作用の評価に対応
(右)GPCR内在化：直接的かつ定量的にGPCRの内在化(エンドサイトーシス)を評価

[文献] Design, Characterization, and First-In-Human Study of the Vascular Actions of a Novel Biased Apelin Receptor Agonist　(直リンク・無料ダウンロード)

アペリン((Pyr1apelin13)は、アペリン受容体に結合し、循環器制御において重要な役割を果たしている。 最近の文献 (Brame AL et al. (2015) )では、DiscoveRxのセルベースアッセイを利用してバイアスリガンドであるMM07を同定したことが報告された。これらの結果はバイアスがかかったアペリンアゴニストが、肺動脈性肺高血圧症のような疾患の治療法として有効である可能性を示唆している。

Comparison of in vitro functional activity of [Pyr1]apelin-13 (■) and MM07 (●) in G-protein-independent β-arrestin recruitment and receptor internalization cell-based assays. 


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No.40 文献リスト [GPCR PathHunter Arrestin]-5

DiscoveRxのPathHunter アレスチンアッセイは、高い信頼性を誇るGPCR機能アッセイでございます。現在150報以上に及ぶ文献が報告されており、世界中の研究者の皆様にご活用いただいています。5回に分けて本ブログに掲載させていただいております。（※ターゲット毎に分類されております。）

文献リスト [GPCR PathHunter Arrestin]-1
文献リスト [GPCR PathHunter Arrestin]-2
文献リスト [GPCR PathHunter Arrestin]-3
文献リスト [GPCR PathHunter Arrestin]-4

Melanin-concentrating Hormone Receptors (メラニン凝集ホルモン受容体)

GPCR Target	Reference
MCHR1	Sakurai T, Ogawa K, Ishihara Y, Kasai S, Nakayama M. (2014). The MCH(1) receptor, an anti-obesity target, is allosterically inhibited by 8-methylquinoline derivatives possessing subnanomolar binding and long residence times. Br J Pharmacol.. 171(5):1287-98.

Melanocortin Receptors (メメラノコルチン受容体)

GPCR Target	Reference
MC1R	Nix MA, Kaelin CB, Ta T, Weis A, Morton GJ, Barsh GS, Millhauser GL. (2013). Molecular and functional analysis of human b-defensin 3 action at melanocortin receptors. Chem Biol 20(6):784-95.
MC1R	Benned-Jensen T, Mokrosinski J, and Rosenkilde MM. (2011). The E92K melanocortin 1 receptor mutant induces cAMP production and arrestin recruitment but not ERK activity indicating biased constitutive signaling. PLoS One 6, e24644.
MC4R	Ghamari-Langroudi M, Digby GJ, Sebag JA, Millhauser GL, Palomino R, Matthews R, Gillyard T, Panaro BL, Tough IR, Cox HM, Denton JS, Cone RD. (2015). G-protein-independent coupling of MC4R to Kir7.1 in hypothalamic neurons. Nature. [Epub ahead of print]

Neurotensin Receptors (ニューロテンシン受容体)

GPCR Target	Reference
NTS1	Hershberger PM, Hedrick MP, Peddibhotla S, Mangravita-Novo A, Gosalia P, Li Y, Gray W, Vicchiarelli M, Smith LH, Chung TD, Thomas JB, Caron MG, Pinkerton AB, Barak LS, Roth GP. (2014) Imidazole-derived agonists for the neurotensin 1 receptor. Bioorg Med Chem Lett. 24(1):262-7.

Opioid Receptors (オピオイド受容体)

GPCR Target	Reference
OPRD1, OPRK1, OPRM1	Hughes FM, Jr., Shaner BE, Brower JO, Woods RJ and Dix TA. (2013). Development of a peptide-derived orally-active kappa-opioid receptor agonist targeting peripheral pain. Open Med Chem J 2013(7):16-22.
OPRK1	Frankowski KJ, Slauson SR, Lovell KM, Phillips AM, Streicher JM, Zhou L, Whipple DA, Schoenen FJ, Prisinzano TE, Bohn LM, Aube J. (2014). Potency enhancement of the κ-opioid receptor antagonist probe ML140 through sulfonamide constraint utilizing a tetrahydroisoquinoline motif. Bioorg Med Chem S0968-0896(14)00881-5.
OPRK1	Schmid CL, Streicher JM, Groer CE, Munro TA, Zhou L and Bohn LM. (2013). Functional selectivity of 6'-guanidinonaltrindole (6'-GNTI) at kappa opioid receptors in striatal neurons. J Biol Chem 288(31):22387-98.
OPRK1	Beguin C, Potuzak J, Xu W, Liu-Chen, LY, Streicher, JM, Groer, CE, Bohn, LM, Carlezon, WA, Jr., and Cohen, B.M. (2012). Differential signaling properties at the kappa opioid receptor of 12-epi-salvinorin A and its analogues. Bioorg Med Chem Lett 22(2):1023-6.
OPRK1	Roberts LR, Brady K, Brown A, Davey D, Feng L, Huang H, Liu D, Malet L, McMurray G, Phelan A, Saunders K and Bhat A. (2012). Kappa agonist CovX-Bodies. Bioorg Med Chem Lett 22(12):4173-8.
OPRK1	Hedrick MP, Gosalia P, Frankowski K, Shi S, Prisinzano TE, Schoenen F, Aube J, Su Y, Vasile S, Sergienko E, et al. (2010). Selective KOP receptor antagonists: Probe 1. Probe Reports from the NIH Molecular Libraries Program [Internet]. Bethesda (MD): National Center for Biotechnology Information 2010 Feb 28 [updated 2010 Oct 4].
OPRK1, OPRM1	Zhou L, Lovell KM, Frankowski KJ, Slauson SR, Phillips AM, Streicher JM, Stahl EL, Schmid CL, Hodder P, Madoux F, Cameron MD, Prisinzano TE, Aube J and Bohn LM. (2013). Development of functionally selective, small molecule agonists at kappa opioid receptors. J Biol Chem 288(51):36703-16.
OPRM1	Burford NT, Traynor JR and Alt A. (2015). Positive allosteric modulators of the μ-opioid receptor: a novel approach for future pain medications. Br J Pharmacol. 172(2):277-86. (review paper)
OPRM1	Bird MF, Vardanyan RS, Hruby VJ, Calo G, Guerrini R, Salvadori S, Trapella C, McDonald J, Rowbotham DJ, Lambert D (2015). Development and characterisation of novel fentanyl-delta opioid receptor antagonist based bivalent ligands. Br J Anaesth. 114(4):646-56.
OPRM1	Burford NT, Clark MJ, Wehrman TS, Gerritz SW, Banks M, O’Connell J, Traynor JR and Alt A. (2013). Discovery of positive allosteric modulators and silent allosteric modulators of the μ-opioid receptor. Proc Natl Acad Sci USA 110(26):10830-5.
OPRM1	Chen XT, Pitis P, Liu G, Yuan C, Gotchev D, Cowan CL, Rominger DH, Koblish M, Dewire SM, Crombie AL, Violin JD, Yamashita DS. (2013). Structure-Activity Relationships and Discovery of a G Protein Biased μ Opioid Receptor Ligand, [(3-Methoxythiophen-2-yl)methyl]({2-[(9R)-9-(pyridin-2-yl)-6-oxaspiro-[4.5]decan-9-yl]ethyl})amine (TRV130), for the Treatment of Acute Severe Pain. J Med Chem 56(20):8019-31.
OPRM1	Nickolls SA, Humphreys S, Clark M and McMurray G. (2013). Co-expression of GRK2 reveals a novel conformational state of the m-opioid receptor. PLoS ONE 8(12): e83691.
OPRM1	Nickolls SA, Waterfield A, Williams RE and Kinloch RA. (2011). Understanding the effect of different assay formats on agonist parameters: a study using the m-opioid receptor. J Biomol Screen16(7):706-16.
OPRM1 (Arrestin & Internalization)	DeWire SM, Yamashita DS, Rominger DH, Liu G, Cowan CL, Graczyk TM, Chen XT, Pitis PM, Gotchev D, Yuan C, Koblish M, Lark MW and Violin JD. (2013). A G protein-biased ligand at the μ-opioid receptor is potently analgesic with reduced gastrointestinal and respiratory dysfunction compared with morphine. J Pharmacol Exp Ther 344(3):708-17.
OPRM1 (Internalization)	McPherson J, Rivero G, Baptist M, Llorente J, Al-Sabah S, Krasel C, Dewey WL, Bailey CP, Rosethorne EM, Charlton SJ et al. (2010). m-opioid receptors: correlation of agonist efficacy for signalling with ability to activate internalization. Mol Pharmacol 78(4):756-66.
OPRM1, OPRD1	Burford NT, Wehrman T, Bassoni D, O'Connell J, Banks M, Zhang L, Alt A. (2014). Identification of Selective Agonists and Positive Allosteric Modulators for mu- and δ-Opioid Receptors from a Single High-Throughput Screen. J Biomol Screen. 19(9):1255-65.
OPRM1, OPRD1	Fujita W, Gomes I, Dove LS, Prohaska D, McIntyre G, Devi LA. (2014). Molecular characterization of eluxadoline as a potential ligand targeting mu-delta opioid receptor heteromers. Biochem Pharmacol 92(3):448-56.

Parathyroid Hormone Receptors (副甲状腺ホルモン受容体)

GPCR Target	Reference
PTHR1	Cupp ME, Song B, Kibler P, Raghavender US, Nayak SK, Thomsen W, Galande AK. (2013). Investigating hydrophobic ligand-receptor interactions in parathyroid hormone receptor using peptide probes. J Pept Sci 19(6):337-44.
PTHR1	Bivi N, Lezcano V, Romanello M, Bellido T, Plotkin LI. (2011). Connexin43 interacts with βarrestin: a pre-requisite for osteoblast survival induced by parathyroid hormone. J Cell Biochem112(10):2920-30.
PTHR1 (Internalization)	Cupp ME, Nayak SK, Adem AS and Thomsen WJ. (2013). Parathyroid hormone (PTH) and PTH-related peptide domains contributing to activation of different PTH receptor-mediated signaling pathways. J Pharmacol Exp Ther 345(3):404-18.

Purinergic P2Y Receptors (プリンP2Y受容体)

GPCR Target	Reference
P2YR12	Foster HR, Fuerst E, Lee TH, Cousins DJ and Woszczek G. (2013). Characterisation of P2Y(12) receptor responsiveness to cysteinyl leukotrienes. PLoS One 8:e58305.
P2YR12	Fredman G, Van Dyke TE and Serhan CN. (2010). Resolvin E1 regulates adenosine diphosphate activation of human platelets. Arterioscler Thromb Vasc Biol 30(10):2005-13.

Serotonin Receptors (セロトニン受容体)

GPCR Target	Reference
5HT2A	Schmid CL, Streicher JM, Meltzer HY, Bohn LM. (2014). Clozapine acts as an agonist at serotonin 2A receptors to counter MK-801-induced behaviors through a βarrestin2-independent activation of Akt. Neuropsychopharmacology. 39(8):1902-13.
5HT2A	Blough BE, Landavazo A, Decker AM, Partilla JS, Baumann MH, Rothman RB. (2014). Interaction of psychoactive tryptamines with biogenic amine transporters and serotonin receptor subtypes. Psychopharmacology (Berl). 231(21):4135-44.
5HT2A, 5HT2C	Clarke WP, Chavera TA, Silva M, Sullivan LC, Berg KA. (2013). Signalling profile differences: paliperidone versus risperidone. Br J Pharmacol 170(3):532-45.
5HT2B	Unett DJ, Gatlin J, Anthony TL, Buzard DJ, Chang S, Chen C, Chen X, Dang HTM, Frazer J, Le MK, Sadeque AJM, Xing C and Gaidarov I. (2013). Kinetics of 5-HT2B receptor signaling: profound agonist-dependent effects on signaling onset and duration. J Pharmacol Exp Ther 347(3):645-59.

Somatostatin Receptors (ソマトスタチン受容体)

GPCR Target	Reference
SSTR2	Zhao X, Jones A, Olson KR, Peng K, Wehrman T, Park A, Mallari R, Nebalasca D, Young SW and Xiao SH. (2008). A homogeneous enzyme fragment complementation-based beta-arrestin translocation assay for high-throughput screening of G-protein-coupled receptors. J Biomol Screen 13(8):737-47.

Thyrotropin (Glycoprotein Hormone) Receptorss (サイロトロピン受容体)

GPCR Target	Reference
TSHR	Boutin A, Eliseeva E, Gershengorn MC, Neumann S. (2014). β-Arrestin-1 mediates thyrotropin-enhanced osteoblast differentiation. FASEB J. 28(8):3446-55.

VIP and PACAP Receptors

GPCR Target	Reference
VPAC2	Chu A, Caldwell JS, and Chen YA. (2010). Identification and characterization of a small molecule antagonist of human VPAC(2) receptor. Mol Pharmacol 77(1):95-101.

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No.39 文献リスト [GPCR PathHunter Arrestin]-4

DiscoveRxのPathHunter アレスチンアッセイは、高い信頼性を誇るGPCR機能アッセイでございます。現在150報以上に及ぶ文献が報告されており、世界中の研究者の皆様にご活用いただいています。5回に分けて本ブログに掲載させていただいております。（※ターゲット毎に分類されております。）

文献リスト [GPCR PathHunter Arrestin]-1
文献リスト [GPCR PathHunter Arrestin]-2
文献リスト [GPCR PathHunter Arrestin]-3

Endothelin Receptors (エンドセリン受容体)

GPCR Target	Reference
EDNRA, EDNRB	Maguire JJ, Kuc RE, Pell VR, Green A, Brown M, Kumar S, Wehrman T, Quinn E and Davenport AP. (2012). Comparison of human ET(A) and ET(B) receptor signalling via G-protein and beta-arrestin pathways. Life Sci 91(13-14):544-9.

Follicle Stimulating Hormone Receptors (Glycoprotein Hormone Receptors) 
(卵胞刺激ホルモン受容体・糖蛋白ホルモン受容体)

GPCR Target	Reference
FSHR	Jiang X, Fischer D, Chen X, McKenna SD, Liu H, Sriraman V, Yu HN, Goutopoulos A, Arkinstall S, He X. (2014). AEvidence for Follicle-stimulating Hormone Receptor as a Functional Trimer. J Biol Chem. 289(20):14273-82.

Formylpeptide Receptors (ホルミルペプチド受容体)

GPCR Target	Reference
FPR1	Forsman H, Onnheim K, Andreasson E and Dahlgren C. (2011). What formyl peptide receptors, if any, are triggered by compound 43 and lipoxin A4? Scand J Immunol 74(3):227-34.
FPR1, FPR2	Cilibrizzi A, Schepetkin IA, Bartolucci G, Crocetti L, Dal Piaz V, Giovannoni MP, Graziano A, Kirpotina LN, Quinn MT and Vergelli C. (2012). Synthesis, enantioresolution, and activity profile of chiral 6-methyl-2,4-disubstituted pyridazin-3(2H)-ones as potent N-formyl peptide receptor agonists. Bioorg Med Chem 20(12):3781-92.
FPR2/ALX	Dalli J, Consalvo AP, Ray V, Di Filippo C, D'Amico M, Mehta N and Perretti M. (2013). Proresolving and tissue-protective actions of annexin A1-based cleavage-resistant peptides are mediated by formyl peptide receptor 2/lipoxin A4 receptor. J Immunol 190(12):6478-87.

Ghrelin Receptors (グレリン受容体)

GPCR Target

Reference

GHSR

Bhattacharya SK, Andrews K, Beveridge R, Cameron KO, Chen C, Dunn M, Fernando D, Gao H, Hepworth D, Jackson VM, Khot V, Kong J, Kosa RE, Lapham K, Loria PM, Londregan AT, McClure KF, Orr ST, Patel J, Rose C, Saenz J, Stock IA, Storer G, VanVolkenburg M, Vrieze D, Wang G, Xiao J, Zhang Y. (2014). Discovery of PF-5190457, a Potent, Selective, and Orally Bioavailable Ghrelin Receptor Inverse Agonist Clinical Candidate. ACS Med Chem Lett. 5(5):474-9.

Glucagon Receptors (グルカゴン受容体)

GPCR Target	Reference
GLP1R	Al-Sabah S, Al-Fulaij M, Shaaban G, Ahmed HA, Mann RJ, Donnelly D, Bunemann M, Krasel C. (2014). The GIP receptor displays higher basal activity than the GLP-1 receptor but does not recruit GRK2 or arrestin3 effectively. PLoS ONE 9(9):e106890.
GLP1R	Heard KR, Wu W, Li Y, Zhao P, Woznica I, Lai JH, Beinborn M, Sanford DG, Dimare MT, Chiluwal AK, Peters DE, Whicher D, Sudmeier JL, Bachovchin WW. (2013). A General Method for Making Peptide Therapeutics Resistant to Serine Protease Degradation: Application to Dipeptidyl Peptidase IV Substrates. J Med Chem 56(21):8339-51.
GLP1R (Arrestin & Internalization)	Morris LC, Nance KD, Gentry PR, Days EL, Weaver CD, Niswender CM, Thompson AD, Jones CK, Locuson CW, Morrison RD, Daniels JS, Niswender KD, Lindsley CW. (2014). Discovery of (S)-2-cyclopentyl-N-((1-isopropylpyrrolidin2-yl)-9-methyl-1-oxo-2,9-dihydro-1H-pyrrido[3,4-b]indole-4-carboxamide (VU0453379): a novel, CNS penetrant glucagon-like peptide 1 receptor (GLP-1R) positive allosteric modulator (PAM). J Med Chem. 57(23):10192-7.

Histamine Receptors (ヒスタミン受容体)

GPCR Target	Reference
HRH4	Nijmeijer S, Vischer HF, Sirci F, Schultes S, Engelhardt H, de Graaf C, Rosethorne EM, Charlton SJ and Leurs R. (2013). Detailed analysis of biased histamine H4 receptor signalling by JNJ 7777120 analogues. Br J Pharmacol 170(1):78-88.
HRH4	Rosethorne EM and Charlton SJ. (2011). Agonist-biased signaling at the histamine H4 receptor: JNJ7777120 recruits beta-arrestin without activating G proteins. Mol Pharmacol 79(4):749-57.

Lysophospholipid Receptors (リゾリン脂質受容体)

GPCR Target	Reference
S1P1 (EDG1)	Gatfield J, Monnier L, Studer R, Bolli MH, Steiner B, Nayler O (2014). Sphingosine-1-phosphate (S1P) displays sustained S1P1 receptor agonism and signaling through S1P lyase-dependent receptor recycling. Cell Signal. 26(7):1576-88.
S1P1 (EDG1)	Purschke WG, Hoehlig K, Buchner K, Zboralski D, Schwoebel F, Vater A, Klussmann S (2014). Identification and characterization of a mirror-image oligonucleotide that binds and neutralizes sphingosine 1-phosphate, a central mediator of angiogenesis. Biochem J 462(1):153-62.
S1P1 (EDG1)	Lundstrom K. (2013). Present and future approaches to screening of G-protein-coupled receptors. Future Med Chem 5(5): 523-38.
S1P1 (EDG1)	Xu H, McElvain M, Fiorino M, Henkle B, Sherman L, Xu Y, Tominey E, Kelley K, Adlam M, Burli R, Siu J, Wong M and Cee VJ. (2013). Predictability of peripheral lymphocyte reduction of novel S1P1 sgonists by in vitro GPCR signaling, J Biomol Screen 18(9):997-1007.
S1P1 (EDG1)	Taylor S, Gray JR, Willis R, Deeks N, Haynes A, Campbell C, Gaskin P, Leavens K, Demont E, Dowell S, Cryan J, Morse M, Patel A, Garden H and Witherington J.(2012). The utility of pharmacokinetic-pharmacodynamic modeling in the discovery and optimization of selective S1P(1) agonists. Xenobiotica 42(7):671-86.
S1P1 (EDG1)	Sanders MP, Roumen L, van der Horst E, Lane JR, Vischer HF, van Offenbeek J, de Vries H, Verhoeven S, Chow KY, Verkaar F, Beukers MW, McGuire R, Leurs R, Ijzerman AP, de Vlieg J, de Esch IJ, Zaman GJ, Klomp JP, Bender A and de Graaf C. (2012). A prospective cross-screening study on G-protein-coupled receptors: lessons learned in virtual compound library design. J Med Chem55(11):5311-25.
S1P1 (EDG1)	van Der Lee MM, Bras M, van Koppen CJ and Zaman GJ.(2008). beta-Arrestin recruitment assay for the identification of agonists of the sphingosine 1-phosphate receptor EDG1. J Biomol Screen 13(10):986-98.
S1P1 (EDG1) (Arrestin & Internalization)	Sykes DA, Riddy DM, Stamp C, Bradley ME, McGuiness N, Sattikar A, Guerini D, Rodrigues I, Glaenzel A, Dowling MR, Mullershausen F, Charlton SJ. (2014). Investigating the molecular mechanisms through which FTY720-P causes persistent S1P1 receptor internalization. Br J Pharmacol. 171(21):4797-807.
S1P3 (EDG3)	Riddy D, Stamp C, Sykes D, Charlton S and Dowling M. (2012). Reassessment of the pharmacology of sphingosine-1-phosphate S1P(3) receptor ligands using the DiscoveRx PathHunter and Ca(2+) release functional assays. Br J Pharmacol 167(4):868-80.

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No.38 文献リスト [GPCR PathHunter Arrestin]-3

DiscoveRxのPathHunter アレスチンアッセイは、高い信頼性を誇るGPCR機能アッセイでございます。現在150報以上に及ぶ文献が報告されており、世界中の研究者の皆様にご活用いただいています。5回に分けて本ブログに掲載させていただいております。（※ターゲット毎に分類されております。）

文献リスト [GPCR PathHunter Arrestin]-1
文献リスト [GPCR PathHunter Arrestin]-2

Class A Orphan Receptors (クラスAオーファン受容体)

GPCR Target	Reference
Orphans	Southern C, Cook JM, Neetoo-Isseljee Z, Taylor DL, Kettleborough CA, Merritt A, Bassoni DL, Raab WJ, Quinn E, Wehrman TS, Davenport AP, Brown AJ, Green A, Wigglesworth MJ and Rees S. (2013). Screening β-arrestin recruitment for the identification of natural ligands for orphan G-protein-coupled receptors. J Biomol Screen 18(5):599-609.
GPR3	Ye C, Zhang Z, Wang Z, Hua Q, Zhang R, Xie X.. (2014).Identification of a novel small-molecule agonist for human G protein-coupled receptor 3. J Pharmacol Exp Ther. 349(3):437-43.
GPR18	Console-Bram L, Brailoiu E, Brailoiu GC, Sharir H, Abood ME. (2014). Activation of GPR18 by cannabinoid compounds: a tale of biased agonism. Br J Pharmacol. 171(16):3908-17.
GPR18, GPR55	Rempel V, Atzler K, Behrenswerth A, Karcz T, Schoeder C, Hinz S, Kaleta M, Thimm D, Kiec-Kononowiczb K, Muller CE (2014). Bicyclic imidazole-4-one derivatives: a new class of antagonists for the orphan G protein-coupled receptors GPR18 and GPR55. MedChemComm 5, 632-49.
GPR18, GPR55	Fuchs A, Rempel V and Muller CE. (2013). The natural product magnolol as a lead structure for the development of potent cannabinoid receptor agonists. PLoS One 8(10): e77739.
GPR32	Krishnamoorthy S, Recchiuti A, Chiang N, Fredman G and Serhan CN. (2012). Resolvin D1 receptor stereoselectivity and regulation of inflammation and proresolving microRNAs. Am J Pathol 180(5):2018-27.
GPR32	Krishnamoorthy S, Recchiuti A, Chiang N, Yacoubian S, Lee CH, Yang R, Petasis NA and Serhan CN. (2010). Resolvin D1 binds human phagocytes with evidence for proresolving receptors. Proc Natl Acad Sci USA 107(4):1660-5.
GPR35	MacKenzie AE, Caltabiano G, Kent TC, Jenkins L, McCallum JE, Hudson BD, Nicklin SA, Fawcett L, Lane R, Charlton SJ and Milligan G. (2014). The antiallergic mast cell stabilizers lodoxamide and bufrolin as the first high and equipotent agonists of human and rat GPR35. Mol Pharmacol 85(1):91-104.
GPR35	Neetoo-Isseljee Z, MacKenzie AE, Southern C, Jerman J, McIver EC, Harries N, Taylor DL and Milligan G. (2013). High-throughput identification and characterization of novel, species-selective GPR35 agonists. J Pharmacol 344(3): 568-78.
GPR35	Jenkins L, Alvarez-Curto E, Campbell K, de Munnik S, Canals M, Schlyer S and Milligan G. (2011). Agonist activation of the G protein-coupled receptor GPR35 involves transmembrane domain III and is transduced via Galpha(1)(3) and beta-arrestin-2. Br J Pharmacol 162(3):733-48.
GPR35, GPR55	Reggio P, Shore D. (2015). The Therapeutic Potential of Orphan GPCRs, GPR35 and GPR55. Front Pharmacol (review article) 6:69.
GPR35, GPR55	Funke M, Thimm D, Schiedel AC and Muller CE. (2013). 8-benzamidochromen-4-one-2-carboxylic acids - potent and selective agonists for the orphan G protein-coupled receptor GPR35. J Med Chem 56(12):5182-97.
GPR55	Kargl J, Brown AJ, Andersen L, Dorn G, Schicho R, Waldhoer M and Heinemann A. (2013). A selective antagonist reveals a potential role of G protein-coupled receptor 55 in platelet and endothelial cell function. J Pharmacol Exp Ther 346(1):54-66.
GPR55	Rempel V, Volz N, Gluser F, Nieger M, Bruse S and Muller CE. (2013). Antagonists for the orphan G-protein-coupled receptor GPR55 based on a coumarin scaffold. J Med Chem56(11):4798-810.
GPR55	Yamashita A, Oka S, Tanikawa T, Hayashi Y, Nemoto-Sasaki Y, Sugiura T. (2013). The actions and metabolism of lysophosphatidylinositol, an endogenous agonist for GPR55. Prostaglandins Other Lipid Mediat 107:103-16.
GPR101	Cho-Clark M, Larco DO, Semsarzadeh NN, Vasta F, Mani SK, Wu TJ. (2014). GnRH-(1-5) Transactivates EGFR in Ishikawa Human Endometrial Cells via an Orphan G Protein-Coupled Receptor. Mol Endocrinol 28(1):80-98.
Orphan Panel, GPR173	Larco DO, Cho-Clark M, Mani SK and Wu TJ. (2013). The metabolite GnRH-(1-5) inhibits the migration of immortalized GnRH neurons. Endocrinology 154(2):783-95.
EBI2 (GPR183)	Gessier F, Preuss I, Yin H, Rosenkilde MM, Laurent S, Endres R, Chen YA, Marsilje TH, Seuwen K, Nguyen DG, Sailer AW (2014). Identification and characterization of small molecule modulators of the Epstein-Barr virus-induced gene 2 (EBI2) receptor. J Med Chem. 57(8):3358-68.
EBI2 (GPR183)	Benned-Jensen T, Norn C, Laurent S, Madsen CM, Larsen HM, Arfelt KN, Wolf RM, Frimurer T, Sailer AW, Rosenkilde MM. (2013). Molecular characterization of oxysterol binding to the Epstein-Barr virus-induced gene 2 (GPR183). J Biol Chem 287(42):35470-83.
EBI2 (GPR183)	Benned-Jensen T, Madsen CM, Arfelt KN, Smethurts C, Blanchard A, Jepras R, Rosenkilde MM. (2013). Small molecule antagonism of oxysterol-induced Epstein-Barr virus induced gene 2 (EBI2) activation. FEBS Open Bio. 19;3:156-60.

Dopamine Receptors (ドーパミン受容体)

GPCR Target	Reference
DRD1	Conroy JL, Free RB, Sibley DR. (2015) Identification of G Protein-Biased Agonists That Fail To Recruit β-Arrestin or Promote Internalization of the D1 Dopamine Receptor. ACS Chem Neurosci.
DRD1	Lee SM, Kant A, Blake D, Murthy V, Boyd K, Wyrick SJ, Mailman RB. (2014) SKF-83959 is not a highly-biased functionally selective D1 dopamine receptor ligand with activity at phospholipase C. Neuropharmacology. 86:145-54
DRD2	Brust TF, Hayes MP, Roman DL, Burris KD, Watts VJ.(2015) Bias analyses of preclinical and clinical D2 dopamine ligands: studies with immediate and complex signaling pathways. J Pharmacol Exp Ther.352(3):480-93
DRD2	Dix AV, Conroy JL, George Rosenker KM, Sibley DR, Appella DH.(2015) PNA-Based Multivalent Scaffolds Activate the Dopamine D2 Receptor. ACS Med. Chem. Lett
DRD2	Free RB, Chun LS, Moritz AE, Miller BN, Doyle TB, Conroy JL, Padron A, Meade JA, Xiao J, Hu X, Dulcey AE, Han Y, Duan L, Titus S, Bryant-Genevier M, Barnaeva E, Ferrer M, Javitch JA, Beuming T, Shi L, Southall NT, Marugan JJ, Sibley DR (2014). Discovery and characterization of a G protein-biased agonist that inhibits β-arrestin recruitment to the D2 dopamine receptor. Mol Pharmacol. 2014 86(1):96-105.
DRD2	Allen JA, Yost JM, Setola V, Chen X, Sassano MF, Chen M, Peterson S, Yadav PN, Huang XP, Feng B, Jensen NH, Che X, Bai X, Frye SV, Wetsel WC, Caron MG, Javitch JA, Roth BL, Jin J. (2011). Discovery of β-arrestin-biased dopamine D2 ligands for probing signal transduction pathways essential for antipsychotic efficacy. Proc Natl Acad Sci USA 108(45):18488-93.
DRD2, DRD3	van Wieringen JP, Michel MC, Janssen HM, Janssen AG, Elsinga PH, Booij J. (2014). Agonist signalling properties of radiotracers used for imaging of dopamine D2/3 receptors. EJNMMI Research 4:53
DRD2, DRD3	Xiao J, Free RB, Barnaeva E, Conroy J, Doyle T, Bryant-Genevier M, Taylor MK, Southall N, Hu X, Ferrer M, Titus S, Zheng W, Sibley DR, Marugan JJ. (2014). Discovery, optimization, and characterization of a novel series of dopamine D2 versus D3 receptor selective antagonists. Probe Reports from the NIH Molecular Libraries Program [Internet].
DRD2, DRD3	Ananthan S, Saini SK, Zhou G, Hobrath JV, Padmalayam I, Zhai L, Bostwick JR, Antonio T, Reith ME, McDowell S, Cho E, McAleer L, Taylor M, Luedtke RR. (2014). Design, synthesis, and structure-activity relationship studies of a series of [4-(4-carboxamidobutyl)]-1-arylpiperazines: insights into structural features contributing to dopamine D3 versus D2 receptor subtype selectivity. J Med Chem 16(75):7042-60.
DRD2, DRD3	Meade JA, Free RB, Miller NR, Chun LS, Doyle TB, Moritz AE, Conroy JL, Watts VJ, Sibley DR. (2014). (-)-Stepholidine is a potent pan-dopamine receptor antagonist of both G protein- and β-arrestin-mediated signaling. Psychopharmacology. 232(5):917-30.
DRD2, DRD3	Hiller C, Kling RC, Heinemann FW, Meyer K, Hubner H, Gmeiner, P. (2013). Functionally selective dopamine D2/D3 receptor agonists comprising an enyne moiety. J Med Chem 56(12):5130-41.
DRD3	Chen J, Levant B, Jiang C, Keck TM, Newman AH, Wang S. (2014). Tranylcypromine substituted cis-hydroxycyclobutylnaphthamides as potent and selective dopamine D-epsilon receptor antagonists. J Med Chem. 57(11):4962-8.
DRD3	Furman CA, Roof RA, Moritz AE, Miller BN, Doyle TB, Free RB, Banala AK, Paul NM, Kumar V, Sibley CD, Newman AH, Sibley DR. (2014). Investigation of the binding and functional properties of extended length D3 dopamine receptor-selective antagonists. Eur Neuropsychopharmacol.
DRD3	Banala AK, Levy BA, Khatri SS, Furman CA, Roof, RA, Mishra Y, Griffin SA, Sibley DR, Luedtke RR, and Newman AH. (2011). N-(3-fluoro-4-(4-(2-methoxy or 2,3-dichlorophenyl)piperazine-1-yl)butyl)arylcarboxamides as selective dopamine D3 receptor ligands: critical role of the carboxamide linker for D3 receptor selectivity. J Med Chem 54(10):3581-94.

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No.37 文献リスト [GPCR PathHunter Arrestin]-2

DiscoveRxのPathHunter アレスチンアッセイは、高い信頼性を誇るGPCR機能アッセイでございます。現在150報以上に及ぶ文献が報告されており、世界中の研究者の皆様にご活用いただいています。5回に分けて本ブログに掲載させていただいております。（※ターゲット毎に分類されております。）

文献リスト [GPCR PathHunter Arrestin]-1

Angiotensin Receptors (アンジオテンシン受容体)

GPCR Target	Reference
AGTR1	Dabul S, Bathgate-Siryk A, Valero TR, Jafferjee M, Sturchler E, McDonald P, Koch WJ, Lymperopoulos A. (2015). Suppression of adrenal βarrestin1-dependent aldosterone production by ARBs: head-to-head comparison. Sci Reports 5:8116.
AGTR1	Li H, Kem DC, Zhang L, Huang B1, Liles C, Benbrook A, Gali H, Veitla V, Scherlag BJ, Cunningham MW, Yu X. (2015). Novel retro-inverso Peptide inhibitor reverses Angiotensin receptor autoantibody-induced hypertension in the rabbit. Hypertension. 65(4):793-9.
AGTR1	Kim KS, Abraham D, Williams B, Violin JD, Mao L and Rockman HA. (2012). Beta-Arrestin-biased AT1R stimulation promotes cell survival during acute cardiac injury. Am J Physiol Heart Circ Physiol 303:H1001-10.
AGTR1	Violin JD, DeWire SM, Yamashita D, Rominger DH, Nguyen L, Schiller K, Whalen EJ, Gowen M and Lark MW. (2010). Selectively engaging beta-arrestins at the angiotensin II type 1 receptor reduces blood pressure and increases cardiac performance. J Pharmacol Exp Ther 335(3):572-579.

Apelin Receptors (アペリン受容体)

GPCR Target	Reference
AGTRL1	Siddiquee K, Hampton J, McAnally D, May L and Smith L. (2013). The apelin receptor inhibits the angiotensin II type 1 receptor via allosteric trans-inhibition. Br J Pharmacol 168(5):1104-17.
AGTRL1 (Arrestin & Internalization)	Brame AL, Maguire JJ, Yang P, Dyson A, Torella R, Cheriyan J, Singer M, Glen RC, Wilkinson IB, Davenport AP (2015).Design, characterization, and first-in-human study of the vascular actions of a novel biased apelin receptor agonist. Hypertension. 65(4):834-40.

Calcitonin Receptors (カルシトニン受容体)

GPCR Target	Reference
CALCRL+RAMP1	Hay DL, Harris PWR, Kowalczyk R, Brimble MA, Rathbone DL, Barwell J, Conner AC and Poyner DR. (2014). Structure-activity relationships of the N-terminus of calcitonin gene-related peptide: key roles of alanine-5 and threonine-6 in receptor activation. Br J Pharmacol 171(2):415-26.
CALCRL+RAMP1	Andreassen KV, Hjuler ST, Furness SG, Sexton PM, Christopoulos A, Nosjean O, Karsdal MA, Henriksen K. (2014) Prolonged calcitonin receptor signaling by salmon, but not human calcitonin, reveals ligand bias. Plos One. 9(3):e92042.
CALCRL+RAMP1	Andreassen KV, Feigh M, Hjuler ST, Gydesen S, Henriksen JE, Beck-Nielsen H, Christiansen C, Karsdal MA, Henriksen K. (2014) A novel oral dual amylin and calcitonin receptor agonist (KBP-042) exerts antiobesity and antidiabetic effects in rats. Am J Physiol Endocrinol Metab. 307(1):E24-33.

Cannabinoid Receptors (カンナビノイド受容体)

GPCR Target	Reference
CNR1	Priestley RS, Nickolls SA, Alexander SP, Kendall DA. (2014). A potential role for cannabinoid receptors in the therapeutic action of fenofibrate. FASEB J.
CNR1	Baillie GL, Horswill J, Anavi-Goffer S, Reggio PH, Abood ME, Bolognini D, McAllister S, Strange PG, Stephens GJ, Pertwee RG, et al. (2013). CB1 Receptor Allosteric Modulators Display both Agonist and Signaling Pathway Specificity. Mol Pharmacol 83(2):322-38.
CNR1	van der Lee MM, Blomenruhr M, van der Doelen AA, Wat JW, Smits N, Hanson BJ, van Koppen CJ and Zaman GJ. (2009). Pharmacological characterization of receptor redistribution and beta-arrestin recruitment assays for the cannabinoid receptor 1. J Biomol Screen 14(7):811-23.
CNR1, CNR2	Altomonte S, Baillie GL, Ross RA, Riley J, Zanda M (2014).The pentafluorosulfanyl group in cannabinoid receptor ligands: synthesis and comparison with trifluoromethyl and tert-butyl analogues. RSC Advances 39(4)20164-76.
CNR1, CNR2	Yang R, Fredman G, Krishnamoorthy S, Agrawal N, Irimia D, Piomelli D and Serhan CN. (2011). Decoding functional metabolomics with docosahexaenoyl ethanolamide (DHEA) identifies novel bioactive signals. J Biol Chem 286(36):31532-41.
CNR2	Dossou KS, Devkota KP, Kavanagh PV, Beutler JA, Egan JM and Moaddel R. (2013). Development and preliminary validation of a plate-based CB1/CB2 receptor functional assay. Anal Biochem437(2):138-43.
CNR2	McGuinness D, Malikzay A, Visconti R, Lin K, Bayne M, Monsma F and Lunn CA. (2009). Characterizing cannabinoid CB2 receptor ligands using DiscoveRx PathHunter beta-arrestin assay. J Biomol Screen 14(1):49-58.

Chemokine Receptors (ケモカイン受容体)

GPCR Target	Reference
CCR1 (Arrestin & Internalization)	Gilchrist A, Gauntner TD, Fazzini A, Alley KM, Pyen DS, Ahn J, Ha SJ, Willett A, Sansom SE, Yarfi JL, Bachovchin KA, Mazzoni MR, Merritt JR. (2014). Identifying bias in CCR1 antagonists using radiolabelled binding, receptor internalization, β-arrestin translocation andchemotaxis assays. Br J Pharmacol. 171(22):5127-38.
CCR1, CCR5	Rummel PC, Thiele S, Hansen LS, Petersen TP, Sparre-Ulrich AH, Ulven T and Rosenkilde MM. (2013). Extracellular disulfide bridges serve different purposes in two homologous chemokine receptors, CCR1 and CCR5. Mol Pharm 84(3):335-45
CCR4	Santulli-Marotto S, Fisher J, Petley T, Boakye K, Panavas T, Luongo J, Kavalkovich K, Rycyzyn M, Wu B, Gutshall L, Coelho A, Hogaboam CM and Ryan, M. (2013). Surrogate antibodies that specifically bind and neutralize CCL17 but not CCL22. Monoclon Antib Immunodiagn Immunother 32(3):162-71.
CCR4	Santulli-Marotto S, Boakye K, Lacy E, Wu S, Luongo J, Kavalkovich K, Coelh A, Hogaboam CM and Ryan M. (2013). Engagement of two distinct binding domains on CCL17 Is required for signaling through CCR4 and establishment of localized inflammatory conditions in the lung. PLoS ONE 8(12): e81465.
CCR5	Steen A, Thiele S, Guo D, Hansen LS, Frimurer TM and Rosenkilde MM. (2013). Biased and constitutive signaling in the CC-chemokine receptor CCR5 by manipulating the interface between transmembrane helices 6 and 7. J Biol Chem 288(18):12511-21.
CCR5	Steen A, Sparre-Ulrich AH, Thiele S, Guo D, Frimurer TM, Rosenkilde MM. (2013). Gating Function of Isoleucine-116 in TM3 (position III:16/3.40) for the activity state of the CC-chemokine receptor 5 (CCR5). Br J Pharmacol 171(6):1566-79.
CCR5	White GE, McNeill E, Christou I, Channon KM and Greaves DR. (2011). Site-directed mutagenesis of the CC chemokine binding protein 35K-Fc reveals residues essential for activity and mutations that increase the potency of CC chemokine blockade. Mol Pharmacol 80(2):328-36.
CCR7, CCR9, PTHR1	Watts AO, Verkaar F, van der Lee MM, Timmerman CA, Kuijer M, van Offenbeek J, van Lith LH, Smit MJ, Leurs R, Zaman GJ and Vischer HF. (2013). β-Arrestin recruitment and G protein signaling by the atypical human chemokine decoy receptor CCX-CKR. J Biol Chem 288(10):7169-81.
Chemokines (multiple)	Verkaar F, van Offenbeek J, van der Lee MM, van Lith LH, Watts AO, Rops AL, Aguilar DC, Ziarek JJ, van der Vlag J, Handel TM, Volkman BF, Proudfoot AE, Vischer HF, Zaman GJ, Smit MJ. (2014). Chemokine cooperativity is caused by competitive glycosaminoglycan binding. J Immunol 192(8):3908-14.
Chemokines (multiple)	Garin A, Johnson Z, Hermant A, Beltran F, Ratinaud Y, Michel A, Krohn S, Gaudet M, Carboni S, Ji H, Missotten M, Leger O, Power C and Proudfoot A. (2013). Chemokine receptor antagonist development. Methods Mol Biol 1013:67-92.
Chemokines (multiple)	Rajagopal S, Bassoni DL, Campbell JJ, Gerard NP, Gerard C and Wehrman TS. (2013). Biased agonism as a mechanism for differential signaling by chemokine receptors. J Biol Chem 288(49):35039-48.
CMKLR1	Graham KL, Zhang JV, Lewen S, Burke TM, Dang T, Zoudilova M, Sobel RA, Butcher EC, Zabel BA. (2014). A novel CMKLR1 small molecule antagonist suppresses CNS autoimmune inflammatory disease. PLoS One. 9(12):e112925.
CXCR2	Kashima K, Watanabe M, Sato Y, Hata J, Ishii N, Aoki Y. (2014).Inhibition of metastasis of rhabdomyosarcoma by a novel neutralizing antibody to CXC chemokine receptor-4. Cancer Sci 105(10):1343-50.
CXCR2	de Kruijf P, van Heteren J, Lim HD, Conti PG, van der Lee MM, Bosch L, Ho KK, Auld D, Ohlmeyer M, Smit MJ, et al. (2009). Nonpeptidergic allosteric antagonists differentially bind to the CXCR2 chemokine receptor. J Pharmacol Exp Ther 329(2):783-90.
CXCR3	Bernat V, Brox R, Heinrich MR, Auberson YP, Tschammer N. (2015) Ligand-Biased and Probe-Dependent Modulation of Chemokine Receptor CXCR3 Signaling by Negative Allosteric Modulators. ChemMedChem. 10(3):566-74.
CXCR3	Bernat V, Admas TH, Brox R, Heinemann FW, Tschammer N. (2014). Boronic Acids as Probes for Investigation of Allosteric Modulation of the Chemokine Receptor CXCR3. ACS Chem Biol. 9(11):2664-77.
CXCR3	Scholten DJ, Canals M, Wijtmans M, de Munnik S, Nguyen P, Verzijl D, de Esch IJ, Vischer HF, Smit MJ and Leurs R. (2012). Pharmacological characterization of a small-molecule agonist for the chemokine receptor CXCR3. Br J Pharmacol 166(3):898-911.
CXCR4	Castaldo C, Benicchi T, Otrocka M, Mori E, Pilli E, Ferruzzi P, Valensin S, Diamanti D, Fecke W, Varrone M, Porcari V. (2014) CXCR4 Antagonists: A Screening Strategy for Identification of Functionally Selective Ligands. J Biomol Screen. 19(6):859-869.
CXCR4, CXCR7	Segers VF, Revin V, Wu W, Qiu H, Yan Z, Lee RT and Sandrasagra A.(2011). Protease-resistant stromal cell-derived factor-1 for the treatment of experimental peripheral artery disease. Circulation 123(12):1306-15.
CXCR7	Zabel BA, Wang Y, Lewen S, Berahovich RD, Penfold ME, Zhang P, Powers J, Summers BC, Miao Z, Zhao B, Jalili A, Janowska-Wieczorek A, Jaen JC and Schall TJ. (2009). Elucidation of CXCR7-mediated signaling events and inhibition of CXCR4-mediated tumor cell transendothelial migration by CXCR7 ligands. J Immunol183(5):3204-11.
CXCR7 (Internalization)	Liu S, Alomran R, Chernikova SB, Lartey F, Stafford J, Jang T, Merchant M, Zboralski D, Zollner S, Kruschinski A, Klussmann S, Recht L, and Brown MJ. (2014). Blockade of SDF-1 after irradiation inhibits tumor recurrences of autochthonous brain tumors in rats. Neuro-Oncol 16(1): 2-18

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No.36 文献リスト [GPCR PathHunter Arrestin]-1

DiscoveRxのPathHunter アレスチンアッセイは、高い信頼性を誇るGPCR機能アッセイでございます。現在150報以上に及ぶ文献が報告されており、世界中の研究者の皆様にご活用いただいています。5回に分けて本ブログに掲載させていただきたいと思います。（※ターゲット毎に分類されております。）

Multiple GPCRs (複数GPCR)

GPCR Target	Reference
Multiple	Stahl EL, Zhou L, Ehlert FJ, Bohn LM. (2015). A Novel Method for Analyzing Extremely Biased Agonism at G Protein-Coupled Receptors. Mol Pharmacol.
Multiple	Tena-Campos M, Ramon E, Rivera D, Borroto-Escuela DO, Romero-Fernandez W, Fuxe K, Garriga P. (2014). G-protein-coupled receptors oligomerization: emerging signaling units and new opportunities for drug design. Curr Protein Pept Sci. 15(7):648-58
Multiple	Verkaar F, van Rosmalen JW, Blomenröhr M, van Koppen CJ, Blankesteijn WM, Smits JF and Zaman GJ.(2008). G protein-independent cell-based assays for drug discovery on seven-transmembrane receptors. Biotechnol Annu Rev 14:253-74.
Multiple (ProLink Vector, Parental)	Yin H, Chu A, Li W, Wang B, Shelton F, Otero F, Nguyen DG, Caldwell JS and Chen YA. (2009). Lipid G protein-coupled receptor ligand identification using beta-arrestin PathHunter assay. J Biol Chem 284(18):12328-38.
S1P1, GCGR, CHRM5, HRH2, OPRD1, ADRB2	Bassoni DL, Raab WJ, Achacoso PL, Loh CY and Wehrman TS. (2012). Measurements of beta-arrestin recruitment to activated seven transmembrane receptors using enzyme complementation. Methods Mol Biol 897:181-203.

Acetylcholine Receptors　(アセチルコリン受容体)

GPCR Target	Reference
CHRM1	Digby GJ, Noetzel MJ, Bubser M, Utley TJ, Walker AG, Byun NE, Lebois EP, Xiang Z, Sheffler DJ, Cho HP, et al. (2012). Novel allosteric agonists of M1 muscarinic acetylcholine receptors induce brain region-specific responses that correspond with behavioral effects in animal models. J Neurosci 32(25):8532-44.
CHRM1	Watt ML, Schober DA, Hitchcock S, Liu B, Chesterfield AK, McKinzie D and Felder CC. (2011). Pharmacological characterization of LY593093, an M1 muscarinic acetylcholine receptor-selective partial orthosteric agonist. J Pharmacol Exp Ther 338(2):622-632.
CHRM1	Ma L, Seager MA, Wittmann M, Jacobson M, Bickel D, Burno M, Jones K, Graufelds VK, Xu G, Pearson M et al. (2009). Selective activation of the M1 muscarinic acetylcholine receptor achieved by allosteric potentiation. Proc Natl Acad Sci USA 106(37):15950-5.
CHRM3	Li H, Yu X, Liles C, Khan M, Vanderlinde-Wood M, Galloway A, Zillner C, Benbrook A, Reim S, Collier D, Hill MA, Raj SR, Okamoto LE, Cunningham MW, Aston CE, Kem DC. (2014). Autoimmune basis for postural tachycardia syndrome. J Am Heart Assoc. 26;3(1):e000755.
CHRM3	Li H, Kem DC, Reim S, Khan M, Vanderlinde-Wood M, Zillner C, Collier D, Liles C, Hill MA, Cunningham MW, Aston CE and Yu X. (2012). Agonistic autoantibodies as vasodilators in orthostatic hypotension: a new mechanism. Hypertension 59(2):402-8.
CHRM3	Poulin B, Butcher A, McWilliams P, Bourgognon JM, Pawlak R, Kong KC, Bottrill A, Mistry S, Wess J, Rosethorne EM, Charlton SJ and Tobin AB. (2010). The M3-muscarinic receptor regulates learning and memory in a receptor phosphorylation/arrestin-dependent manner. Proc Natl Acad Sci U S A 107(20):9440-5.
CHRM3	Kong KC, Butcher AJ, McWilliams P, Jones D, Wess J, Hamdan FF, Werry T, Rosethorne EM, Charlton SJ, Munson SE, Cragg HA, Smart AD and Tobin AB. (2010). M3-muscarinic receptor promotes insulin release via receptor phosphorylation/arrestin-dependent activation of protein kinase D1. Proc Natl Acad Sci USA 107(49):21181-6.

Adenosine Receptors　(アデノシン受容体)

GPCR Target	Reference
ADORA2B	Gao ZG, Balasubramanian R, Kiselev E, Wei Q, Jacobson KA. (2014). Probing biased/partial agonism at the G protein-coupled A(2B) adenosine receptor. Biochem Pharmacol. 90(3):297-306.
ADORA3	Verzijl D and Ijzerman AP. (2011). Functional selectivity of adenosine receptor ligands. Purinergic Signal 7(2):171-92.
ADORA3	Gao ZG, Verzijl D, Zweemer A, Ye K, Goblyos A, Ijzerman AP and Jacobson KA. (2011). Functionally biased modulation of A(3) adenosine receptor agonist efficacy and potency by imidazoquinolinamine allosteric enhancers. Biochem Pharmacol 82(6):658-68.
ADORA3	Gao ZG and Jacobson KA. (2008). Translocation of arrestin induced by human A(3) adenosine receptor ligands in an engineered cell line: comparison with G protein-dependent pathways. Pharmacol Res 57(4):303-11.
ADRA2C	Kurko D, Kapui Z, Nagy J, Lendvai B, Kolok S. (2014). Analysis of functional selectivity through G protein-dependent and -independent signaling pathways at the adrenergic α2C receptor. Brain Res Bull. 107: 89-10.

Adrenoreceptors　(アドレナリン受容体)

GPCR Target	Reference
ADRB1	Hutchings CJ, Cseke G, Osborne G, Woolard J, Zhukov A, Koglin M, Jazayeri A, Pandya-Pathak J, Langmead CJ, Hill SJ, Weir M, Marshall FH. (2014). Monoclonal anti-β1-adrenergic receptor antibodies activate G protein signaling in the absence of β-arrestin recruitment. mAbs. 6(1):246-61.
ADRB2	Rosethorne EM, Bradley ME, Kent TC, Charlton SJ. (2015). Functional desensitization of the β2 adrenoceptor is not dependent on agonist efficacy. Pharmacol Res Perspect. 3(1):e00101.
ADRB2	Kopra K, Kainulainen M, Mikkonen P, Rozwandowicz-Jansen A, Hänninen P and Härmä H. (2013). Multiparametric homogeneous method for identification of ligand binding to G protein-coupled receptors: receptor-ligand binding and β-arrestin assay. Analytical Chemistry 85(4):2276-228.
ADRB2	Weiss DR, Ahn S, Sassano MF, Kleist A, Zhu X, Strachan R, Roth BL, Lefkowitz RJ and Shoichet BK. (2013). Conformation guides molecular efficacy in docking screens of activated β-2 adrenergic G-protein coupled receptor. ACS Chem Biol 8(5):1018-26.

Anaphylotoxin Chemotactic Receptors (Complement Peptide Family)　（アナフィラトキシン)

GPCR Target	Reference
C5L2	Van Lith LH, Oosterom J, Van Elsas A and Zaman GJ. (2009). C5a-stimulated recruitment of β-Arrestin2 to the nonsignaling 7-transmembrane decoy receptor C5L2. J Biomol Screen14(9):1067-75.

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